สรุปและคำอธิบายการทดสอบ
ไข้มาลาเรียเป็นโรคไข้เลือดออกที่มียุงเป็นพาหะ ติดเชื้อกว่า 200 ล้านคนและคร่าชีวิตผู้คนมากกว่า 1 ล้านคนต่อปีเกิดจากเชื้อพลาสโมเดียม 4 สายพันธุ์ ได้แก่ P. falciparum, P. vivax, P. ovale และ P. malariaeพลาสโมเดียเหล่านี้ติดเชื้อและทำลายเม็ดเลือดแดงของมนุษย์ ทำให้เกิดอาการหนาวสั่น มีไข้ โลหิตจาง และม้ามโตP. falciparum ทำให้เกิดโรคที่รุนแรงกว่าสายพันธุ์พลาสโมเดียลอื่น ๆ และเป็นสาเหตุการเสียชีวิตจากโรคมาลาเรียส่วนใหญ่เชื้อ P. falciparum และ P. vivax เป็นเชื้อก่อโรคที่พบได้บ่อยที่สุด อย่างไรก็ตาม การกระจายพันธุ์มีความหลากหลายทางภูมิศาสตร์อย่างมาก
ตามเนื้อผ้า มาลาเรียได้รับการวินิจฉัยโดยการสาธิตของสิ่งมีชีวิตบน Giemsa ที่มีรอยเปื้อนหนาของเลือดส่วนปลาย และพลาสโมเดียมชนิดต่างๆ นั้นมีลักษณะเฉพาะในเม็ดเลือดแดงที่ติดเชื้อ1เทคนิคนี้มีความสามารถในการวินิจฉัยที่แม่นยำและเชื่อถือได้ แต่เมื่อดำเนินการโดยนักจุลทรรศน์ที่เชี่ยวชาญโดยใช้โปรโตคอลที่กำหนดไว้2 ซึ่งนำเสนออุปสรรคสำคัญสำหรับพื้นที่ห่างไกลและยากจนของโลก
ชุดทดสอบแอนติเจนอย่างรวดเร็วของมาลาเรีย Pf / Pan ได้รับการพัฒนาขึ้นเพื่อแก้ไขอุปสรรคเหล่านี้การทดสอบใช้โมโนโคลนอลและโพลีโคลนอลแอนติบอดี 1 คู่ต่อโปรตีนจำเพาะของ P. falciparum, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II) และโมโนโคลนอลแอนติบอดี 1 คู่ต่อพลาสโมเดียมแลคเตตดีไฮโดรจีเนส (pLDH) ซึ่งเป็นโปรตีนที่ผลิตโดยพลาสโมเดียมทั้ง 4 สายพันธุ์ ดังนั้นจึงทำให้สามารถตรวจหาและแยกความแตกต่างของการติดเชื้อด้วย P. falciparum และหรือพลาสโมเดียอื่นๆ อีก 3 ชนิดได้พร้อมกันสามารถทำได้โดยบุคลากรที่ไม่ได้รับการฝึกฝนหรือมีทักษะน้อยที่สุด โดยไม่ต้องมีอุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ
หลักการ
ชุดทดสอบ Pf/ Pan Malaria Rapid Test เป็นชุดตรวจทางภูมิคุ้มกันด้วยโครมาโตกราฟีแบบไหลด้านข้างส่วนประกอบแถบทดสอบประกอบด้วย: 1) แผ่นคอนจูเกตสีเบอร์กันดีที่มีแอนติบอดีต่อต้าน pHRP-II ของหนูเมาส์ที่ผสานกับคอลลอยด์โกลด์ (pHRP II-โกลด์คอนจูเกต) และแอนติบอดีต่อต้าน pLDH ของหนูเมาส์ที่ผสานด้วยคอลลอยด์โกลด์ (pLDH-โกลด์คอนจูเกต)
2) แถบเมมเบรนไนโตรเซลลูโลสที่มีแถบทดสอบสองแถบ (แถบแพนและ Pv) และแถบควบคุม (แถบ C)แถบแพนถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้าน pLDH ซึ่งสามารถตรวจพบการติดเชื้อพลาสโมเดียชนิดใดก็ได้ในสี่สายพันธุ์ แถบ Pf ถูกเคลือบล่วงหน้าด้วยโพลีโคลนอลแอนติบอดีต่อต้าน pHR-II สำหรับตรวจหาการติดเชื้อ Pf และแถบ C เคลือบด้วย IgG ของหนูที่ต่อต้านแพะ
ในระหว่างการทดสอบ จะมีการจ่ายตัวอย่างเลือดในปริมาณที่เพียงพอลงในหลุมตัวอย่าง (S) ของตลับทดสอบ บัฟเฟอร์สลายจะถูกเพิ่มลงในหลุมบัฟเฟอร์ (B)บัฟเฟอร์ประกอบด้วยสารชะล้างที่สลายเซลล์เม็ดเลือดแดงและปล่อยแอนติเจนในพลาสโมเดียมต่างๆ ซึ่งเคลื่อนย้ายโดยการกระทำของเส้นเลือดฝอยผ่านแถบที่บรรจุในตลับpHRP-II หากมีอยู่ในชิ้นงานทดสอบจะจับกับคอนจูเกต pHRP II-ทองคำจากนั้น อิมมูโนคอมเพล็กซ์จะถูกจับบนเมมเบรนโดยแอนติบอดีต่อต้าน pHRPII ที่เคลือบไว้ล่วงหน้า เกิดเป็นแถบ Pf สีเบอร์กันดี ซึ่งบ่งชี้ผลการทดสอบ Pf เป็นบวกpLDH หากมีอยู่ในชิ้นงานจะจับกับคอนจูเกตทองคำ pLDHจากนั้น อิมมูโนคอมเพล็กซ์จะถูกจับบนเมมเบรนโดยแอนติบอดีต่อต้าน pLDH ที่เคลือบไว้ล่วงหน้า เกิดเป็นแถบสีเบอร์กันดี ซึ่งบ่งชี้ผลการทดสอบพลาสโมเดียมเป็นบวกในกรณีที่ไม่มี Pan band สามารถแนะนำผลการทดสอบที่เป็นบวกสำหรับพลาสโมเดียตัวอื่นจากสามตัว
การไม่มีแถบทดสอบใด ๆ (Pan และ Pf) แสดงว่ามีผลเป็นลบการทดสอบประกอบด้วยการควบคุมภายใน (แถบ C) ซึ่งควรแสดงแถบสีเบอร์กันดีของอิมมูโนคอมเพล็กซ์ของ IgG ที่ต่อต้านหนูจากแพะ / IgG ของหนู (pHRP-II และ pLDH-gold conjugates) โดยไม่คำนึงถึงการพัฒนาสีบนแถบทดสอบใดๆมิฉะนั้นผลการทดสอบจะไม่ถูกต้องและต้องทดสอบชิ้นงานทดสอบซ้ำกับอุปกรณ์อื่น
